湖北白癜风QQ交流群 http://www.haoweicy.com/lehuo/1276.html白血病和淋巴瘤免疫表型检测一 项目概述流式细胞术（FCM）白血病淋巴瘤免疫分型是利用不同荧光素标记的单克隆抗体（McAb）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。
二 临床意义
正常情况下，造血系统的各类细胞在发生发育过程中有其固有的抗原表达规律。而在白血病状态下，白血病细胞本身虽然未发现特殊性的白血病抗原，但其抗原表达的正常规律遭到破坏。免疫分型的原理之一是基于白血病细胞的分化阻滞学说，即白血病细胞仅出现某个细胞发育阶段（常常为幼稚期的）抗原表达特征而使患者白细胞的正常表达抗原谱出现中断（阻滞）现象。同时白血病细胞的抗原表达还可能出现异常的组合，如早期抗原和晚期抗原同时表达,髓细胞抗原和淋巴细胞抗原的共表达等。依据其抗原表达谱不但可以准确诊断白血病的细胞来源（髓系，淋系，红系，单核系，巨核系或浆细胞），进行免疫分型,还常常可以正确诊断某些白血病的核型（如与11q23有关的急性淋巴细胞白血病常常有特定的CD19+，CD10-，CD15+抗原谱）。淋巴细胞在发育的各个阶段都可以发生恶变，如果是在早期发生恶变，并进一步的发展，则会产生一种叫做淋巴细胞性白血病的血液病，它可以侵犯到骨髓，血液以及组织，这些细胞反映的是原始淋巴细胞的抗原表达。当淋巴细胞在成熟以后发生恶变，恶性细胞表现出成熟细胞的表型。如果这些分化的淋巴细胞侵犯到淋巴结或其他的淋巴组织或器官，则称为淋巴瘤。但淋巴瘤和淋巴细胞白血病的区别并不是很明显，因为恶性细胞可以同时侵犯组织和血液。流式细胞术已经成为淋巴系统肿瘤临床评价非常必要的工具，该技术可以帮助诊断和鉴别淋巴瘤和CPLD等疾病。尤其在评价B细胞克隆性方面，能够提供明确的免疫球蛋白限制性的证据；在评价T细胞克隆性方面，很难用传统的标志去分析T细胞的克隆性，但T细胞受体（TCR）基因重排的分子生物学分析可以确定T细胞的克隆状态，用流式检测Vβ受体库可以成为非定量的分子克隆性研究的替代方案。目前贝克曼库尔特公司生产出一种商品化的试剂盒用于检测TCRVβ受体库，这个试剂盒包括8瓶试剂，可以检测24种TCRVβ，对于诊断和检测T细胞恶性肿瘤具有极大的作用。多参数流式细胞分析术为白血病和淋巴瘤的诊断和治疗提供了重要的依据。在最近二十年的现代医学实践中，白血病和淋巴瘤的治疗已经有了很大的提高，多参数流式细胞分析术则是为现代白血病治疗配套的必备诊断技术。根据WHO对白血病的最新分类，白血病细胞免疫表型分析是诊断血液恶性肿瘤不可或缺的重要标准之一，并且对临床治疗有关键的指导意义。流式细胞术的多参数分析白血病细胞免疫表型，可了解被测细胞所属的细胞系列及其分化程度。尤其在下列情况下意义更加突出：1.快速筛选出急、慢性白血病，淋巴瘤，骨髓瘤及高危性MDS。2.T细胞白血病的诊断及鉴别诊断。3.各种血液系统恶性肿瘤(白血病或淋巴瘤)的诊断及准确分型。4.已知急、慢性白血病的进一步分型，判断预后和追溯。5.形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。6.非典型白血病包括混合性白血病。7.微小残留白血病。8.骨髓瘤和浆细胞白血病的诊断及鉴别诊断。三 实验方法
1.五色干粉试剂方案
2.样本制备
1）直接在Duraclone试管中加入50μL骨髓样本；2）充分混匀，避光孵育20-30min；3）使用VersaLyse溶血素，避光溶血15min；4）洗涤后上样。
3.上机检测
开启DxFLEX流式细胞仪，打开CytExpert软件，调取已建立好的免疫分型检测方案，分别添加相应新试管，开始获取，根据实际图形适当调节门的位置，读取结果，也可用Kaluza软件进行分析。
4.结果演示
以上结果来源于一例B-ALL病人抗凝骨髓标本，用上述五色方案，在DxFLEX流式细胞仪上进行检测，P2门（红色）为异常细胞群，表达CD19，CD34，HLA-DR，CD20，CD10；不表达CD33，CD，CD2，CD3，CD5，CD7，CD38。结果用CytExpert软件分析。
四八到十色免疫分型方案
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